煙草花葉病毒檢測樣品的收集、處理及保存方法
煙草花葉病毒檢測試劑盒及檢測方法,屬于植物病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的煙草花葉病毒定量檢測試劑盒包括如下分裝試劑和酶標(biāo)板:所述酶標(biāo)板為煙草花葉病毒抗體預(yù)包被酶標(biāo)板;所述分裝試劑為:樣品稀釋液,為磷酸鹽緩沖液;洗滌液,含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1~0.5%的Tween?20的磷酸鹽緩沖液;反應(yīng)終止液,濃度為1.8~2.2mol/L的H2SO4溶液;酶標(biāo)抗體工作液,辣根過氧化物酶標(biāo)記的濃度為2μg/ml的特異性鼠抗煙草花葉病毒單克隆抗體;顯色劑;煙草花葉病毒標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)煙草花葉病毒的定量檢測,且快速、準(zhǔn)確度高、靈敏度高
煙草花葉病毒檢測試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被煙草花葉病毒(TMV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入陰性對照、陽性對照、樣本、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的煙草花葉病毒(TMV)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),判斷樣品是否含有煙草花葉病毒(TMV)。
煙草花葉病毒檢測樣品的收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)
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