用于測定纖維素酶(1,4-β-葡聚糖酶)的CellG3檢測試劑含有兩種成分;1) 4,6- o-芐基-2-氯-4-硝基苯基-β- d纖維素糖苷(BCNPG3)和2)耐熱β-葡萄糖苷酶。芐基阻斷組阻止β-葡萄糖苷酶對BCNPG3的任何水解作用。與纖維素內(nèi)酶孵育產(chǎn)生非阻塞比色法低聚糖,由輔助的β-葡萄糖苷酶迅速水解。因此,2-氯-4-硝基b酚的生成速率與纖維素內(nèi)酶對BCNPG3的水解直接相關(guān)。加入
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1) 4,6- o-芐基-2-氯-4-硝基苯基-β- d纖維素糖苷(BCNPG3)和2)耐熱β-葡萄糖苷酶。芐基阻斷組阻止β-葡萄糖苷酶對BCNPG3的任何水解作用。與纖維素內(nèi)酶孵育產(chǎn)生非阻塞比色法低聚糖,由輔助的β-葡萄糖苷酶迅速水解。因此,2-氯-4-硝基b酚的生成速率與纖維素內(nèi)酶對BCNPG3的水解直接相關(guān)。加入pH為9.0的Tris緩沖液后,反應(yīng)終止,b酚顯色。
請注意,一種新的檢測試劑盒(K-CellG5)現(xiàn)已可用來測量纖維素內(nèi)酯酶。CellG5試劑含有纖維戊糖芯,對某些纖維素酶表現(xiàn)出極大的敏感性。此外,將CellG3中的芐基阻斷基團與CellG5中的3-酮-丁烯交換,顯著改善了底物的水溶性,從而降低了測定所需的DMSO濃度。,DMSO可以抑制某些纖維素酶,這是使用CellG5的另一個好處。Megazyme現(xiàn)在推薦使用K-CellG5進行所有測定纖維素內(nèi)酶的方法。