煙草花葉病毒檢測(cè)可在多種植物上越冬,也可附著在番茄種子上、土壤中的病殘?bào)w上越冬,田間越冬寄主殘?bào)w、烤曬后的煙葉、煙絲均可成為該病的初侵染源。主要通過(guò)汁液接觸傳染,只要寄主有傷口,即可侵入。黃瓜花葉病毒主要由蚜蟲(chóng)傳染,此外用汁液摩擦接種也可傳染。冬季病毒多在宿根雜草上越冬,春季蚜蟲(chóng)遷飛傳毒,引致發(fā)病。番茄病毒病的發(fā)生與環(huán)境條件關(guān)系密切,一般高溫干旱天氣利于病害發(fā)生。此外,施用過(guò)量的氮肥,植株組織生長(zhǎng)柔嫩或土壤瘠薄、板結(jié)、黏重以及排水不良發(fā)病重。番茄病毒的毒源種類在一年里往往有周期性的變化,春夏兩季煙草花葉病毒比例較大,而秋季黃瓜花葉病毒為主。因此,生產(chǎn)上防治時(shí)應(yīng)針對(duì)病毒的來(lái)源,采取相應(yīng)的措施,才能收到較滿意的效果。
煙草花葉病毒檢測(cè)樣品的收集、處理及保存方法:
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃。
煙草花葉病毒檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法,屬于植物病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的煙草花葉病毒定量檢測(cè)試劑盒包括如下分裝試劑和酶標(biāo)板:所述酶標(biāo)板為煙草花葉病毒抗體預(yù)包被酶標(biāo)板;所述分裝試劑為:樣品稀釋液,為磷酸鹽緩沖液;洗滌液,含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1~0.5%的Tween?20的磷酸鹽緩沖液;反應(yīng)終止液,濃度為1.8~2.2mol/L的H2SO4溶液;酶標(biāo)抗體工作液,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的濃度為2μg/ml的特異性鼠抗煙草花葉病毒單克隆抗體;顯色劑;煙草花葉病毒標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)煙草花葉病毒的定量檢測(cè),且快速、準(zhǔn)確度高、靈敏度高。