淀粉總量檢測實際用到的方法包含哪些部分
淀粉可以看作是葡萄糖的高聚體。淀粉除食用外,工業(yè)上用于制糊精、麥芽糖、葡萄糖、酒精等,也用于調(diào)制印花漿、紡織品的上漿、紙張的上膠、藥物片劑的壓制等。可由玉米、甘薯、野生橡子和葛根等含淀粉的物質(zhì)中提取而得。
淀粉是谷物碳水化合物的主要成分也是人和動物所需能量的重要來源。淀粉由于來源、組成及結(jié)構(gòu)不同其在動物和人體內(nèi)消化的速度和部位存在差異,如快速消化淀粉在小腸的前段即迅速消化而抗性淀粉(ResistantstarchRS)在小腸內(nèi)幾乎不降解,主要在大腸內(nèi)依靠微生物發(fā)酵產(chǎn)生揮發(fā)性,脂肪酸。
1.標準曲線的制作
加入蒽酮試劑時,好將各管放在冷水中,并沿管壁緩緩加入,待全部加完后,再混勻。將以上標準管和樣品管同時在100℃水浴中加熱10min,取出自來水冷卻,以空白作參比,在620nm波長下測其光密度,以光密度為縱坐標,以糖含量為橫坐標,繪制標準曲線,并求出標準線性方程。
2.可溶性糖的提取
稱取1g樣品,加5ml80%乙醇,研磨成勻漿,80℃水浴中浸提10min,冷卻,離心5min,重復(fù)浸提一次,離心5min合并以上離心后的上清液于25ml溶量瓶,用80%乙醇定容至刻度,沉淀備用測定淀粉。
3.顯色測定
吸取樣品提取液0.1ml,加1.9ml蒸餾水,再沿管壁緩緩加5ml硫酸-蒽酮試劑,待全部加完后混勻,在100℃水浴中加熱10min,在100℃水浴中加熱10min,以不加樣液管為對照,在620nm波長下測其光密度。
4.計算
可溶性糖含量(%)={[查標準曲線(μg)×(樣品液總體積/顯色用樣液體積)×稀釋倍數(shù)]/樣品(g)}×100
5.還原糖含量測定:取0.5ml稀釋液(1ml提取液稀釋至10ml),加入1.5ml蒸餾水,1.5ml3,5-二硝基水楊酸,混勻,沸水浴5min,冷水冷卻,定容至25ml,用(53WBUV/VIS)分光光度計于520測定OD值。
6.淀粉的提取
沉淀加水2ml,沸水浴糊化15min,冷卻后加9.2N高氯酸2ml,不時攪拌15min后加水2ml離心,上清液倒入50ml溶量瓶中,沉淀加2ml4.6N高氯酸,不時攪拌15min后加水3ml離心10min,上清液倒入50ml溶量瓶中,沉淀再加4ml水,離心10min,合并上清液并用蒸餾水定容。
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