抗性淀粉檢測對人健康的益處
抗性淀粉可以影響人和動物日糧中各種養(yǎng)分的消化與吸收,對人的健康有利。在延緩糖尿病人餐后血糖上升、肥胖控制、預(yù)防腸道疾病、降低血中膽固醇和能量消化率等具有重要的生理功能。
抗性淀粉檢測原理(AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40)
樣品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)37℃振蕩水浴孵育16小時,在這期間,通過兩種酶的聯(lián)合作用,非抗性淀粉被溶解,水解成D-葡萄糖,孵育結(jié)束后,加入等體積的乙醇或工業(yè)甲基化酒精(IMS,變性乙醇)終止反應(yīng)。離心上述溶液,收集上清勿棄,底部殘留絮狀團即為樣品中的RS,用含水的IMS或乙醇(50%v/v)洗滌絮狀團,洗滌后離心,再重復(fù)一次洗滌離心,收集離心后獲得的上清,與之前收集的上清混合。小心倒出試管殘留的液體,將絮狀團置于冰水浴中,加入2M KOH溶解,溶解的同時用磁力攪拌機劇烈攪拌。用醋酸鹽緩沖液將這個溶液調(diào)至中性,用AMG將淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/過氧化物酶試劑(GOPOD)測定,這也是對樣品中RS含量的測定。非抗性淀粉(可溶性淀粉)的測定可通過集中的上清液并定容至100mL,再用GOPOD測定D-葡萄糖完成。
抗性淀粉檢測含量的方法,其步驟如下:
①.取樣:稱?。梗担保埃担恚鐦悠酚陔x心試管中;
②.*次酶解反應(yīng):加胰α-淀粉酶反應(yīng)液3.8-4.5ml,放入35-40℃的水浴恒溫振蕩器中水解,15-17小時后取出,加入3.8-4.2ml乙醇旋渦混勻,以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘,棄上清液,再加入7-13ml乙醇,旋渦混勻,仍然以2800-3100rpm的速度離心10-13分鐘,棄上清液;
③.溶解抗性淀粉:向離心管中加入1.8-2.5ml氫氧化鉀溶液,冰浴振蕩16-21分鐘,再加7.8-9ml醋酸鈉緩沖溶液,搖勻;
④.第二次酶解反應(yīng):加入淀粉葡萄糖苷酶液200-350U/ml,放入48-55℃水浴恒溫振蕩器中,26-31分鐘后取出;
⑤.測定:離心后,吸?。保埃?mu;l上清液于生化分析儀中測定葡萄糖,計算出抗性淀粉含量。